目前國內(nèi)所有二級(jí)以上綜合醫(yī)院都具備了核酸檢測(cè)能力，大部分醫(yī)院也設(shè)立了PCR實(shí)驗(yàn)室，高強(qiáng)度的核酸檢測(cè)任務(wù)已然成為了我們檢驗(yàn)人的工作常態(tài)，但是，如果一旦出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染，可能會(huì)造成假陽性結(jié)果，導(dǎo)致結(jié)果不可信，甚至可能會(huì)危及實(shí)驗(yàn)室工作人員安全。

應(yīng)對(duì)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室污染的最好辦法就是防范于未然，今天就帶大家了解一下實(shí)驗(yàn)中我們?nèi)绾伪苊夂蜏p少污染的產(chǎn)生以及處理污染。

一、污染的產(chǎn)生

在新冠病毒核酸檢測(cè)過程中 ，常見以下幾種污染類型 ：擴(kuò) 增片段的污染 （ 產(chǎn)物污染 ） ；天然基因組 DNA 的污染、試劑 污 染 （ 貯存液或工作液 ） 以及樣本間交叉污染 。核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室 污染的主要來源是擴(kuò)增產(chǎn)物的污染 。

圖片

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過以下途徑及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染 ：

1、采用每次檢測(cè)過程至少3個(gè)陰性對(duì)照隨機(jī)置于臨床樣本中間參與提取全過程。

2、每天對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣進(jìn)行采樣監(jiān)測(cè)?？諝獗O(jiān)測(cè)范圍應(yīng)至少應(yīng)包括樣本制備區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

3、定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、門把手、儀器設(shè)備表面進(jìn)行取樣監(jiān)測(cè)。

4、陽性樣本采用另外一到兩種更為靈敏且擴(kuò)增不同區(qū)域的核酸檢測(cè)試劑對(duì)原始樣本進(jìn)行復(fù)核檢測(cè)。

二、污染的防控

01嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū)

原則上新冠病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)。

根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。各區(qū)域在物理空間上應(yīng)當(dāng)是完全相互獨(dú)立的。傳遞窗滿足密封性要求，不能有空氣的直接相通。各項(xiàng)檢測(cè)工作應(yīng)嚴(yán)格按相應(yīng)規(guī)定在各自的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)禁在樣本制備區(qū)配制試劑。

各區(qū)的功能是：

1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

2、樣本制備區(qū)：轉(zhuǎn)運(yùn)箱的開啟，樣本的滅活（適用時(shí)），核酸提取及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管等。

3、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。

02確保實(shí)驗(yàn)室人、物及空氣單向流動(dòng)

核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的人、物及空氣流向按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)，防止擴(kuò)增產(chǎn)物隨人流、物流及空氣進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域?？諝饬飨驊?yīng)按照從試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行。

03實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)安全管理

（1）基本要求

核酸檢測(cè)應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，并應(yīng)在生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，采取適當(dāng)?shù)膫€(gè)體防護(hù)措施，包括手套、口罩和隔離衣等。開展新冠病毒核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)制定實(shí)驗(yàn)室生物安全相關(guān)程序文件及實(shí)驗(yàn)室生物安全操作失誤或意外的處理操作程序，并有記錄。

（2）實(shí)驗(yàn)室前安全要求

應(yīng)使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行桌面、臺(tái)面及地面消毒。消毒液需每天新鮮配制，不超過24小時(shí)。轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶應(yīng)在生物安全柜內(nèi)開啟。轉(zhuǎn)運(yùn)桶開啟后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)桶內(nèi)壁和標(biāo)本采集密封袋進(jìn)行噴灑消毒。取出標(biāo)本采集管后，應(yīng)首先檢查標(biāo)本管外壁是否有破損、管口是否泄露或是否有管壁殘留物。確認(rèn)無滲漏后，推薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦拭消毒樣品管外表面（此處不建議使用75%酒精，以免破壞標(biāo)本標(biāo)識(shí)）。如發(fā)現(xiàn)滲漏應(yīng)立即用吸水紙覆蓋，并噴灑有效氯含量為0.55%的含氯消毒劑進(jìn)行消毒處理，不得對(duì)標(biāo)本繼續(xù)檢測(cè)操作，做好標(biāo)本不合格記錄后需立即進(jìn)行密封打包，壓力蒸汽滅菌處理后銷毀。

如為采樣管為非滅活管，實(shí)驗(yàn)室操作人員在進(jìn)行標(biāo)本熱滅活時(shí)，溫浴前需旋緊標(biāo)本采集管管蓋，必要時(shí)可用封口膜密閉管蓋；溫浴過程中可每隔10分鐘將標(biāo)本輕柔搖勻1次，以保證標(biāo)本均勻滅活；溫浴后標(biāo)本需靜置至室溫至少10分鐘使氣溶膠沉降，隨后再開蓋進(jìn)行后續(xù)核酸提取。

（3）核酸提取和檢測(cè)安全要求

標(biāo)本進(jìn)行核酸提取和檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。如為打開標(biāo)本管蓋或其他有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。

（4）實(shí)驗(yàn)室結(jié)束后清潔要求。

需要對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行清潔，消除可能的核酸污染。

①實(shí)驗(yàn)室空氣清潔。實(shí)驗(yàn)室每次檢測(cè)完畢后，可采用房間固定和/或可移動(dòng)紫外燈進(jìn)行紫外照射2小時(shí)以上。必要時(shí)可采用核酸清除劑等試劑清除實(shí)驗(yàn)室殘留核酸。

②工作臺(tái)面清潔。每天實(shí)驗(yàn)后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行臺(tái)面、地面清潔。

③生物安全柜消毒。實(shí)驗(yàn)使用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中，包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑消毒其外表面。手消毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實(shí)驗(yàn)室廢棄物轉(zhuǎn)運(yùn)袋中。試管架、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、移液器等使用75%酒精進(jìn)行擦拭。隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘。

④轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒。轉(zhuǎn)運(yùn)及存放標(biāo)本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行擦拭或噴灑消毒。

⑤塑料或有機(jī)玻璃材質(zhì)物品清潔：使用0.2%含氯消毒劑或過氧乙酸或過氧化氫擦拭或噴灑。

（5）轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒

轉(zhuǎn)運(yùn)及存放樣本的容器使用前后需使用有效氯含量為0.2%的消毒劑或75%酒精進(jìn)行擦拭或噴灑消毒。

04強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程控制

實(shí)驗(yàn)室接到樣本后，應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)對(duì)樣本進(jìn)行清點(diǎn)核對(duì)。按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行試劑準(zhǔn)備、樣本前處理、核酸提取、核酸擴(kuò)增、結(jié)果分析及報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)建立可疑樣本和陽性樣本復(fù)檢的流程。

（1）試劑準(zhǔn)備

應(yīng)當(dāng)選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的試劑，并在選擇樣本采樣管和核酸提取試劑時(shí)，使用試劑盒說明書上建議的配套樣本采樣管和提取試劑。

（2）樣本滅活

已經(jīng)使用含肌鹽的滅活型樣本采樣管的實(shí)驗(yàn)室，這一環(huán)節(jié)無需進(jìn)行滅活處理，直接進(jìn)行核酸提取。使用非滅活型樣本采樣管的實(shí)驗(yàn)室，可采用56℃孵育30分鐘熱滅活的處理方式。

（3）核酸提取

將滅活后的樣本取出，在生物安全柜內(nèi)打開樣本采樣管加樣。核酸提取完成后，立即將提取物進(jìn)行封蓋處理。在生物安全柜內(nèi)將提取核酸力口至PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中。

（4）核酸擴(kuò)增

將擴(kuò)增體系放入擴(kuò)增儀，核對(duì)擴(kuò)增程序是否與試劑說明書相符，啟動(dòng)擴(kuò)增程序。擴(kuò)增后的反應(yīng)管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，按一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實(shí)驗(yàn)室處理。

三、污染的消除

實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生污染，檢測(cè)工作應(yīng)立即停止，直到確認(rèn)消除污染后才能重新開始檢測(cè)。首先，要查找污染源和明確污染范圍。然后，根據(jù)污染源和污染范圍采取有效的去污染措施，結(jié)合各種不同方法以達(dá)到最佳效果。

實(shí)驗(yàn)室污染的處理：

1.標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺(tái)造成局限污染時(shí)：

立即用吸水紙覆蓋，并使用0.55%含氯消毒劑進(jìn)行噴灑消毒。消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時(shí)內(nèi)使用。

2.標(biāo)本傾覆造成實(shí)驗(yàn)室污染時(shí)：

保持實(shí)驗(yàn)室空間密閉，避免污染物擴(kuò)散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。必要時(shí)（如大量溢撒時(shí)）可用過氧乙酸加熱熏蒸實(shí)驗(yàn)室，劑量為2g/m3，熏蒸過夜；或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m3，作用1-2小時(shí)；必要時(shí)或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸：高錳酸鉀8g/m3，放入耐熱耐腐蝕容器（陶罐或玻璃容器），后加入甲醛（40%）10ml/m3，熏蒸4小時(shí)以上。熏蒸時(shí)室內(nèi)濕度60%-80%。

3.清理污染物時(shí)：

嚴(yán)格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸汽滅菌處理，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室換氣等，防止次生危害。