1、目的：

對微生物標準菌株的驗收、復(fù)活、確認、轉(zhuǎn)代、儲存、使用、廢棄等進行規(guī)定，確保標準菌株符合要求，保證檢測結(jié)果。

2、職責(zé)：

2.1、檢測中心主任負責(zé)標準菌株資源的配備。

2.2、微生物檢測室工作人員負責(zé)標準菌株的有效儲存和正確的使用。

3、要求：

3.1、供應(yīng)商的選擇：選擇有資質(zhì)的標準菌株的合格供應(yīng)商，每批標準菌株必須有附件的供應(yīng)商的合格證或檢測報告，來證明所采購的標準菌株是合格的。

3.2、標準菌株和驗收

菌株一到實驗室，一定要記錄好菌株號和標準菌株來源，確保溯源性清楚。同時，還應(yīng)盡可能多的菌株信息，如：標準菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無破損等。

3.3、凍干標準菌株的復(fù)活：

3.3.1、開啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開產(chǎn)品外包裝，撕掉標簽上的拉片，將其貼于菌株保藏管上。

3.3.2、復(fù)活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（根據(jù)生產(chǎn)商說明）進行復(fù)活。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過5代，從標準菌株保藏中心購買的凍干標準菌株為第F0代。捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過擠捏壓碎小球使其與液體混合，立馬上拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于初級培養(yǎng)平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無菌接種環(huán)在先前接種區(qū)域劃線10~20次，促使分離出單菌落。同時吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管馬上 進行培養(yǎng)。細菌培養(yǎng)溫度通常為25℃或37℃。多數(shù)凍干菌株會在幾天后長出，但是少數(shù)菌會表現(xiàn)出延滯期延長的現(xiàn)象，需要將正常培養(yǎng)時間加倍。復(fù)活后的菌株為F1代。

3.3.3、將TSB生長的濃菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混勻后將液體吸出，將保藏管-18℃保存1~3年為標準儲備菌株F2代。將平板上生長的良好菌株接種于營養(yǎng)瓊脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化鈉營養(yǎng)瓊脂）36℃培養(yǎng)24h當作工作菌株，為W3代，記錄為F2代。

3.3.4、工作菌株確認方法及依據(jù)：

大腸桿菌的確認依照“SN 0169-1992出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法”執(zhí)行。

金黃色葡萄球菌的確認依照“SN/T 0172-2010進出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法”執(zhí)行。

沙門氏菌的確認依照“SN 0170-1992出口食品沙門氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗方法”執(zhí)行。

副溶血性弧菌的確認依照“SN/T 0173-2010進出口食品中副溶血性弧菌檢驗方法”執(zhí)行。

3.4、工作菌株的儲存：

3.4.1、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、儲存在2℃~8℃的冰箱內(nèi)。

3.4.2、副溶血性弧菌在常溫條件下保存。

3.4.3、儲存期限：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌為3個月。

3.5、標準菌株的轉(zhuǎn)接：

3.5.1、標準菌株的復(fù)蘇：

① 菌種操作應(yīng)在無菌條件下進行，防止雜菌污染。

② 每次使用和復(fù)蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養(yǎng)。

3.5.2、標準儲備菌株每轉(zhuǎn)接一次須進行確認。

3.5.3、工作菌株轉(zhuǎn)接的方法：

① 配制營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（副溶血性弧菌加3%氯化鈉）并分裝在試管內(nèi)，121℃高壓滅菌15分鐘后擺斜面，冷卻后備用。

② 在無菌條件下，用接種環(huán)挑取菌苔至新奇斜面上作“之”字形劃線接種，放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時。

3.6、工作菌株的使用：

3.6.1、內(nèi)部質(zhì)量操縱 ：一個月一次陽性對比 、培養(yǎng)基每批驗收；

3.6.2、外部質(zhì)量操縱 ：能力驗證、實驗室比對。

3.7、工作菌株的期間核查：

3.7.1、期間核查的頻率：每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

3.7.2、工作菌株期間核查的方法及依據(jù)：同工作菌株的確認。

3.7.3、建立標準菌株期間核查記錄。

3.8、標準菌株的廢棄：

3.8.1、標準菌株如已老化、退化、或變異、污染等，經(jīng)確認試驗不符合的或該菌種已無使用需要的應(yīng)及時銷毀。

3.8.2、廢棄的標準菌株由部門負責(zé)人批準，使用人員放入高壓鍋內(nèi)121℃30min高壓滅菌后作為廢棄物處理。