化學(xué)發(fā)光試劑分析生物的原理

發(fā)布日期：2018-12-29 作者：點(diǎn)擊：

有機(jī)化合物的化學(xué)發(fā)光試劑,有機(jī)化合物的同系物結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似，使單一組分的測(cè)定碰到困難，因此有機(jī)化合物同系物的分析常與 HPLC 相結(jié)合。有機(jī)酸的化學(xué)發(fā)光分析，一般是先將其衍天生熒光物質(zhì)經(jīng)色譜分離后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。但衍生法有如下的缺點(diǎn) : (1) 衍生反應(yīng)不完全 ; (2) 衍生物穩(wěn)定性差，要求及時(shí)檢測(cè) ; (3) 限制了分離方法和條件的選擇。由于衍生產(chǎn)物的性質(zhì)與待測(cè)物不同，導(dǎo)致分離效率和分辨率下降，同時(shí)增加分析的時(shí)間和勞動(dòng)強(qiáng)度。在臨床醫(yī)學(xué)上，草酸是一個(gè)重要的檢測(cè)項(xiàng)目，可以直接用氧化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)測(cè)定尿液和草酸二乙酯中的草酸鹽及游離的草酸。另外還可以測(cè)定苯酮尿癥病人的尿液的苯丙酮酸的含量，方法是先在堿性條件下將苯丙酮酸氧化成 1 ， 22 二氧雜環(huán)丁烷類化合物，然后裂解產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。另外可以將 Fe （ III ）草酸配合物光解得到 Fe (II ) ，催化魯米諾－過氧化氫化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，此法線性范圍為 0 . 1 ～ 100uM 。此外酶聯(lián)偶合反應(yīng)也可以用于某些有機(jī)酸的化學(xué)發(fā)光分析。

有機(jī)堿化學(xué)發(fā)光試劑,胺類化合物*離子化電勢(shì)呈如下規(guī)律 : 伯胺 > 仲胺 > 叔胺，并隨碳鏈增長(zhǎng)，離子化電勢(shì)逐漸下降，因此叔胺化合物的檢測(cè)限較低，達(dá) 0 . 28 pM 。胺類化合物的分析 ( 見表 4) ，較多的是經(jīng)柱前衍生天生熒光衍生物，分離后用過氧草酸鹽化學(xué)發(fā)光體系檢測(cè)，也可將其天生希夫堿或其它產(chǎn)物氧化而發(fā)光。有些堿如腎上腺素等可直接氧化而發(fā)光。通常有一個(gè)經(jīng)驗(yàn)規(guī)則，假如一物質(zhì)具有熒光或其反應(yīng)產(chǎn)物有熒光，該物質(zhì)一般可發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，但也有例外。嘌呤堿是核酸的基礎(chǔ)物質(zhì)，因此對(duì)嘌呤堿的分析測(cè)定將推動(dòng) DNA 分析方法的發(fā)展。在酸性醇液中腺嘌呤與苯甲醛反應(yīng)，然后用過氧化氫氧化反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，此法具有很好的選擇性，線性范圍為 1 . 5×10 － 7 ～ 5 . 0×10 － 7 M ，用此法測(cè)定鳥嘌呤靈敏度比熒光法高 20 倍。

氨基酸化學(xué)發(fā)光試劑,氨基酸分析方法的改進(jìn)有利于推動(dòng)生物技術(shù)、基因工程、 DNA 重組和基因克隆等的發(fā)展。由于盡大多數(shù)氨基酸沒有內(nèi)源熒光特性，因此用過氧草酸鹽體系測(cè)定氨基酸需將其衍天生熒光物質(zhì)，但此法避免不了衍生法所固有的缺點(diǎn)。此外亦可通過測(cè)定氨基酸與氨基酸氧化酶反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化氫來測(cè)定氨基酸的含量，如 L 2 氨基酸經(jīng)反相色譜柱分離后流經(jīng) L 2 氨基酸氧化酶反應(yīng)器產(chǎn)生過氧化氫，然后用過氧草酸鹽體系檢測(cè)。氨基酸與 Ru (b ipy) 3+3 反應(yīng)，用活動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，相對(duì)于脯氨酸和天冬酰胺檢測(cè)限可分別達(dá)到 20 pmo l 和 50 pmo l 。一般來說，仲胺反應(yīng)產(chǎn)生的的發(fā)光強(qiáng)度比伯胺大。對(duì)氨基酸上取代基性質(zhì)研究表明，給電子基有利于增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。